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Coleta de sêmen do garanhão e manuseio para inseminação artificial

Coleta de sêmen do garanhão e manuseio para inseminação artificial

O sêmen dos garanhões geralmente é coletado com uma vagina artificial, com o garanhão montado em uma égua no cio ou em uma montaria fictícia. O sêmen recém-colhido pode então ser avaliado e usado para inseminação artificial de éguas.

Para iniciar um programa de coleta de sêmen / inseminação artificial, os requisitos mínimos incluem:

  • Um galpão de criação, idealmente com uma égua fantasma ou montaria fictícia
  • Vagina artificial e suprimentos relacionados
  • Equipamentos de laboratório, como um microscópio para avaliar a motilidade espermática, uma máquina de contagem de esperma para determinar a concentração espermática, uma incubadora para manter os suprimentos aquecidos e utensílios diversos, como lâminas de microscópio, pipetas e copos plásticos descartáveis.

    A maioria dos garanhões pode ser facilmente treinada para a coleta de sêmen com uma vagina artificial, desde que o manipulador e o técnico de coleta de sêmen tenham experiência. A libido ou desejo sexual do garanhão e a experiência reprodutiva do garanhão também são fatores importantes a serem considerados ao treinar um garanhão para a coleta de sêmen.

    Os programas de inseminação artificial com sêmen fresco proporcionam excelentes resultados, desde que a qualidade do sêmen seja aceitável e o sêmen seja tratado adequadamente após a coleta. Também é muito importante criar a égua no momento certo durante o seu ciclo; portanto, éguas devem ser provocadas até entrarem no calor e, então, serem avaliadas de maneira ideal por palpação e / ou ultra-som para determinar o bom momento de reprodução em relação à ovulação.

    A principal vantagem de realizar inseminação artificial com sêmen fresco é que um ejaculado pode ser dividido entre várias éguas que estão prontas para serem criadas, aumentando assim o livro de éguas para um determinado garanhão em uma determinada estação. A realização de inseminação artificial também evita os riscos inerentes ao manejo de garanhões e éguas para cobertura natural, ou éguas reprodutoras que não são adequadas para procriação durante o calor.

    A principal desvantagem da realização de inseminação artificial é a exigência de equipamentos e treinamento especializados. Se o sêmen não for tratado adequadamente e o momento da inseminação não for preciso, as taxas de gravidez podem ficar abaixo do ideal nos programas de inseminação artificial.

  • O sêmen dos garanhões é mais comumente coletado com o auxílio de uma vagina artificial ao montar uma égua no cio, uma égua ovariectomizada ou uma montaria dummy. Existem vários tipos de vaginas artificiais, e as mais usadas nos Estados Unidos são o Missouri, a Universidade Estadual do Colorado e os japoneses ou Nishikawa. Outros métodos de coleta de sêmen estão disponíveis, incluindo a coleta de sêmen com o garanhão no chão ou a estimulação manual em vez de uma vagina artificial. Estes são bons métodos alternativos em alguns casos, particularmente com garanhões com necessidades especiais, mas não foram amplamente utilizados na coleta rotineira de sêmen e requerem treinamento especial.
  • A escolha da vagina artificial a ser utilizada depende da preferência e experiência do técnico de coleta de sêmen. Por exemplo, o modelo de Missouri é fácil de manusear e lavar e a maioria dos garanhões responde bem com esse tipo de vagina. Além disso, o comprimento dessa vagina se ajusta ao comprimento do pênis da maioria dos garanhões, evitando o choque térmico dos espermatozóides que resultará se o sêmen for exposto à camisa de água da vagina. O design também elimina a possibilidade de contaminação da água da amostra de sêmen.

    Preparando a vagina artificial

  • Antes da coleta de sêmen, o interior da vagina deve estar limpo e seco.
  • Um saco de remoinho estéril ou outro tipo de receptáculo (isto é, mamadeira ou forro de mamadeira) é preso à extremidade distal da vagina artificial para coletar o sêmen durante a ejaculação.
  • O interior da vagina artificial é lubrificado com um lubrificante estéril solúvel em água não espermicida (ou seja, KY Jelly não é aceitável porque contém uma substância bactericida que pode afetar a viabilidade do esperma). O lubrificante é espalhado inserindo o braço do operador na vagina protegida por uma manga de palpação limpa na altura dos ombros. A vagina deve ser lubrificada apenas até cerca de dois terços do seu comprimento para evitar a contaminação excessiva da amostra de sêmen com lubrificante.
  • A jaqueta de água da vagina é então preenchida com água quente da torneira em torno de 50 a 55 graus Celsius. Um termômetro não quebrável pode ser usado para medir a temperatura dentro da abertura da vagina, mas certifique-se de remover o termômetro antes da coleta de sêmen! Uma temperatura final de 42 a 48 ° C é apropriada para a maioria dos garanhões. Muitos garanhões não parecem receber estímulos suficientes para ejacular a temperaturas mais baixas. Temperaturas superiores a 50 ° C podem queimar o pênis do garanhão, resultando em uma experiência negativa a longo prazo.
  • Uma vez que a vagina artificial está na temperatura certa, a concha externa de couro é presa e a pressão do interior da vagina é ajustada liberando água de acordo com o tamanho do pênis e as preferências de pressão do garanhão a serem coletadas. Alguns garanhões exigem mais pressão do que outros para uma estimulação adequada e somente trabalhando regularmente com um garanhão é possível aprender suas preferências individuais. Como regra geral, deve-se conseguir encaixar o braço confortavelmente dentro do lúmen da vagina e fazer um punho com a mão.

    Limpeza e cuidados da vagina artificial

  • A vaginal artificial deve ser cuidadosamente limpa após a coleta do sêmen, para evitar a contaminação cruzada entre garanhões e a contaminação da amostra de sêmen. As etapas exatas de limpeza variam entre fazendas e laboratórios.
  • A maioria das pessoas limpa primeiro o revestimento de borracha apenas com água da torneira. Em seguida, o revestimento de borracha é submerso em um banho de álcool (70% de álcool isopropílico) por cerca de 20 minutos para desinfecção e, em seguida, pendurado em um gabinete limpo para secagem. A maioria dos detergentes deixa resíduos espermicidas, mesmo após uma lavagem completa, portanto deve ser evitado por completo. Os produtos de borracha são particularmente vulneráveis ​​a abrigar resíduos espermicidas. Os agentes espermicidas podem ter graus variados de dano ao esperma. Alguns matam esperma imediatamente, outros lentamente. Portanto, você pode não detectar danos mesmo sob um microscópio antes da inseminação do sêmen, mas o esperma danificado pode não gerar as taxas esperadas de gravidez.

    Todos os utensílios que entram em contato com o sêmen devem ser mantidos em uma incubadora a 98,6 graus Fahrenheit (37 C). Slides e lamínulas podem ser mantidos em cima de um estágio de aquecimento também estabelecido em 98,6 F (37 C). Uma mudança repentina de temperatura resultará em menor viabilidade dos espermatozóides e pode comprometer o programa de melhoramento. No entanto, os espermatozóides também morrem em temperaturas acima de 98,6 F, e a maioria das incubadoras está bem acima disso. Por esse motivo, o sêmen não deve ser colocado em uma incubadora ou em cima de um estágio de aquecimento das lâminas após a coleta, e a temperatura da incubadora sempre deve ser verificada ao remover um item de suprimento que entrará em contato com o sêmen. É melhor ter os suprimentos que entram em contato com o esperma um pouco mais frio do que um pouco quente demais.

    Da mesma forma, todos os utensílios devem estar limpos e secos antes do contato com a amostra de esperma. Água e resíduos de detergentes ou desinfetantes são espermicidas. Por esse motivo, é altamente recomendável o uso de utensílios descartáveis. Todos devem ser avaliados para garantir que não sejam tóxicos para o esperma.

    Processe amostras de sêmen em um laboratório mantido a uma temperatura ambiente constante de aproximadamente 23 a 25 ° C (72 a 75 F). A amostra de sêmen deve ser manuseada com cuidado. Evite derramar no fundo de um cilindro graduado; em vez disso, despeje com cuidado a lateral do cilindro. Além disso, evite a exposição a correntes de ar frias ou luz solar direta. A chave do sucesso é ser completo, mas rápido, no processamento e na extensão da amostra de sêmen, seja para embalagem para remessa ou para inseminação imediata na fazenda.

    Novamente, uma vez processada a amostra de sêmen, não a coloque novamente na incubadora ou em banho-maria quente. Em vez disso, deixe esfriar lentamente até a temperatura ambiente até ser usado para inseminação artificial.

    Às vezes, os êmbolos de borracha das seringas do tipo tradicional são revestidos com uma substância que pode ser tóxica para o esperma. Seringas de plástico não espermicidas (sem êmbolos de borracha) devem ser usadas no manuseio do sêmen e na inseminação.

    Extensores de sêmen

    Os extensores de sêmen são usados ​​para diluir o sêmen, fornecendo uma fonte de energia para as células espermáticas, protegendo os espermatozóides contra mudanças de temperatura e / ou pH e para evitar a contaminação bacteriana excessiva da amostra. Em termos gerais, os extensores prolongam a vida útil da amostra de sêmen.

    O extensor mais comumente usado para inseminação artificial e sêmen refrigerado transportado é um extensor à base de leite que foi desenvolvido pelo Dr. Kenney na Universidade da Pensilvânia em 1975. Esse extensor contém leite desnatado seco e sem gordura (por exemplo, Sanalac® ou marca da loja ), glicose e um antibiótico. Os componentes são misturados em água estéril.

    Originalmente, os antibióticos adicionados ao extensor eram penicilina e gentamicina. Pesquisas mais recentes mostraram que outros antibióticos podem ser mais adequados, pois são menos tóxicos para os espermatozóides ao longo do tempo de armazenamento. Atualmente, os antibióticos mais usados ​​para extensores de sêmen são ticarcilina, amicacina, uma combinação de penicilina e amicacina ou polimixina B.

    Fazer o seu próprio extensor requer treinamento adequado em habilidades de laboratório, uma escala laboratorial precisa e uma fonte confiável de água desionizada estéril, que pode ser comprada embora seja cara. Caso contrário, os componentes pré-medidos do extensor e a água pré-medida podem ser obtidos comercialmente de diferentes empresas que vendem suprimentos para coleta de sêmen eqüino e inseminação artificial.

    Avaliação de sêmen na fazenda

    Idealmente, o volume, a concentração de espermatozóides e a porcentagem de espermatozóides progressivamente móveis devem ser avaliados para cada ejaculado. Portanto, toda operação de criação deve ter um laboratório equipado com uma incubadora, recipientes descartáveis ​​de sêmen (copos ou cilindros graduados), um microscópio e alguns meios de avaliar o esperma.

    A seguir, são sugeridas etapas para avaliação da amostra de sêmen:

  • Aparência da amostra. Isso se refere principalmente à cor. O sêmen é normalmente esbranquiçado a acinzentado e cremoso a translúcido, dependendo da concentração de espermatozóides. Por exemplo, uma amostra amarela pode indicar contaminação com urina e uma amostra rosa ou marrom pode indicar contaminação com sangue, os quais matam o esperma. Uma amostra transparente pode indicar que apenas o fluido seminal e nenhum espermatozóide foram ejaculados. Quaisquer aglomerados, pedaços ou outros detritos devem ser observados.
  • Volume. Isso é medido colocando o sêmen em um cilindro ou copo graduado preciso. O volume é importante apenas como um meio de calcular o número total de espermatozóides na amostra e não tem influência direta na qualidade do ejaculado.
  • Concentração. A concentração de esperma na amostra pode ser medida por meio de um hemocitômetro ou de máquinas disponíveis comercialmente, especialmente projetadas para contar os espermatozóides dos garanhões. A concentração é dada em milhões de espermatozóides por mililitro de sêmen. A concentração de espermatozóides não tem sentido por si só em relação à qualidade do sêmen e é importante apenas no cálculo do número total de espermatozóides.
  • Número total de espermatozóides. O número total de espermatozóides pode ser calculado multiplicando o número de espermatozóides por mililitro (ou concentração) vezes o volume da amostra. O número total de espermatozóides é tradicionalmente expresso em bilhões.
  • Porcentagem de espermatozóides móveis. A porcentagem de espermatozóides móveis é avaliada colocando-se uma gota de sêmen em uma lâmina quente do microscópio e uma lamela quente e observando-a sob o microscópio. Geralmente, são estimados dois tipos de motilidade das células espermáticas. A motilidade total é a porcentagem de esperma que está apenas se movendo, em qualquer forma ou direção. A motilidade progressiva inclui apenas a porcentagem de espermatozóides em movimento em linha reta e é a mais importante.
  • Número total de espermatozóides progressivamente móveis. Uma dose de reprodução com sêmen recém-estendido deve conter um MÍNIMO de 500 milhões de espermatozóides progressivamente móveis. Uma vez calculado o número total de espermatozóides e avaliada a porcentagem de espermatozóides progressivamente móveis, pode-se calcular o número total de espermatozóides progressivamente móveis. Isso nos permitirá saber quantas éguas podem ser criadas com um dado ejaculado.

    Preparação do sêmen

    Uma vez coletado e avaliado adequadamente, o sêmen está pronto para a inseminação de éguas. Embora nem sempre seja necessário, adicionar um extensor para inseminação otimizará a sobrevivência dos espermatozóides durante o tempo necessário para preparar a égua para procriação e reduzirá a contaminação do útero na criação. Isto é especialmente importante em éguas suscetíveis ao desenvolvimento de infecções uterinas após a reprodução. Para inseminação imediata, adicionar um volume igual de diluente que o sêmen (proporção de diluição de 1: 1) geralmente é suficiente e não requer cálculos especiais.

    Enquanto houver espermatozóides móveis progressivamente suficientes, o ejaculado estendido é simplesmente dividido entre o número de éguas a serem reproduzidas ou o ejaculado inteiro é usado para criar uma única égua. A dose mínima de inseminação necessária para não comprometer as taxas de fertilidade é de 500 milhões de espermatozóides progressivamente móveis por égua. No entanto, o máximo de espermatozóides disponível deve ser usado para inseminação.

    Mare Preparação

    Uma vez que se verifique que uma égua (ou grupo de éguas) está pronta para a reprodução, o rabo da égua é enrolado e a área perineal ao redor da vulva é cuidadosamente lavada e lavada três vezes. Os esfregões de iodo com povidona podem ser utilizados para esse fim, mas todos os resíduos devem ser cuidadosamente lavados com água para evitar a introdução desse desinfetante no útero enquanto se insere a pipeta para inseminação. Após uma lavagem e enxaguamento completos, a área perineal é seca com toalhas de papel limpas. A égua está pronta para a inseminação.

    Procedimento de Inseminação

    Na preparação para a inseminação artificial, o volume correspondente de sêmen estendido é aspirado para uma ou mais seringas (sem êmbolo de borracha) conectadas a uma pipeta plástica longa e descartável.

    O veterinário ou gerente que executa o procedimento deve usar uma luva de plástico limpa e uma luva estéril na mão que será usada para introduzir a pipeta no útero. A mão enluvada pode ser lubrificada com uma geléia estéril solúvel em água para facilitar o procedimento. Em seguida, a pipeta é colocada em concha nessa mão e direcionada através dos lábios vulvares, vestíbulo, para dentro da vagina e depois inserida através do colo do útero, enquanto a mão oposta permanece fora da égua para empurrar o êmbolo da seringa e injetar o sêmen através da pipeta. . Para uma inseminação bem sucedida, o sêmen deve ser depositado dentro do útero.